領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
為研究平菇疏水蛋白基因Po.hyd的功能，首次構(gòu)建了Po.hyd的RNAi載體，并通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)獲得了平菇轉(zhuǎn)化子。通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增Po.hyd序列，利用Golden Gate克隆法構(gòu)建了干擾載體p1302-GG-ihyd，將其導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101中，并在乙酰丁香酮的誘導(dǎo)下完成根癌農(nóng)桿菌對(duì)平菇幼嫩菌絲的介導(dǎo)轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化子經(jīng)PCR檢測(cè)、熒光顯微鏡觀察、實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)（real-time PCR）以及Southern雜交等技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，本研究最終獲得1 株可穩(wěn)定遺傳的平菇轉(zhuǎn)化子，該轉(zhuǎn)化子具有潮霉素抗性，且在熒光顯微鏡下可檢測(cè)到綠色熒光信號(hào)，Po.hyd基因的表達(dá)量為野生型的43%，干擾載體T-DNA片段以單拷貝的形式整合在轉(zhuǎn)化子基因組內(nèi)。
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