領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
采用重疊延伸的方法成功將抗孔雀石綠（malachite green，MG）單克隆細(xì)胞的輕鏈VL和重鏈VH用連接肽(Gly4Ser)3連接，形成單鏈抗體（single chain variable fragment，scFv）基因，并將其酶切連接進(jìn)入含有堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，PhoA）基因的載體plip6/GN中，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒plip6/GN-MG-scFv。隨后重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western blotting鑒定結(jié)果表明所獲得的融合蛋白scFv-PhoA大小約72 kD。利用scFv與MG特異性結(jié)合的活性和PhoA催化對硝基苯磷酸二鈉的顯色機(jī)制，經(jīng)過直接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定融合蛋白scFv-PhoA的IC50為9.81 ng/mL。本方法操作簡單、靈敏度高且檢測時(shí)間短，這為進(jìn)一步進(jìn)行MG免疫法快速檢測提供了參考。
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