領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
極端嗜熱α-淀粉酶具有優(yōu)良的高溫活性和熱穩(wěn)定性，因此在淀粉液化工藝中具有巨大的應(yīng)用潛力，并且其高溫適應(yīng)性機(jī)制研究可以為構(gòu)建耐高溫α-淀粉酶提供理論依據(jù)和設(shè)計(jì)思路。通過分析來源于極端嗜熱古生菌Thermococcus kodakarensis KOD1的α-淀粉酶ApkA的氨基酸序列，構(gòu)建缺失信號(hào)肽突變體ApkAds和單點(diǎn)突變體ApkAdsA180K。酶學(xué)性質(zhì)分析表明，與ApkAds相比，突變體ApkAdsA180K的高溫活性和熱穩(wěn)定性明顯提高。其中ApkAds的最適反應(yīng)溫度為90 ℃，對(duì)應(yīng)的酶比活力為2 946.75 U/mg；突變體ApkAdsA180K的最適反應(yīng)溫度為100 ℃，對(duì)應(yīng)的酶比活力為4 501.08 U/mg。ApkAds于90 ℃的半衰期約為5 h，突變體ApkAdsA180K于90 ℃的半衰期約為7 h。通過同源模建得到的蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)顯示，突變體ApkAdsA180K中氨基酸殘基K180與D212間形成離子鍵。本研究結(jié)果表明ApkAdsA180K中K180與D212間離子鍵有利于其維持其高溫活性和熱穩(wěn)定性。
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