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—— 中國食品雜志社
制備弧菌外膜蛋白K（outer membrane protein K，OmpK）單克隆抗體并對其特性進(jìn)行研究。以原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)野生株Vibrio parahaemolyticus B的OmpK免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠脾細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合，采用有限稀釋法和間接酶聯(lián)免疫吸附測定法篩選出能夠穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)制備腹水，用飽和硫酸銨沉淀法和親和層析柱純化抗體。最終獲得能穩(wěn)定分泌抗OmpK的兩株單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株OmpK-Mab-4B7、OmpK-Mab-3C5，2 株雜交瘤細(xì)胞系所分泌的Mab亞類均為IgG1，效價達(dá)1∶128 000，抗體3C5、4B7的敏感度IC50分別為2.5、5.0 μg/mL。Western blotting結(jié)果顯示單克隆抗體可以與本實(shí)驗(yàn)室12 株副溶血性弧菌（V. parahaemolyticus A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、ATCC17802、ATCC33847）的外膜蛋白有不同程度的結(jié)合反應(yīng)，與4 株溶藻弧菌中的3 株（V. alginolyticus A、B、C）外膜蛋白能夠較好的結(jié)合，與1 株鰻弧菌（V. anguillarumMVM）外膜蛋白也有輕微的結(jié)合反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)制備的單克隆抗體可用于弧菌OmpK的基礎(chǔ)研究和快速檢測。
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