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—— 中國食品雜志社
以鮮切荸薺為材料，通過pH 7.5 Tris-HCl緩沖液浸提得到類黃酮3’-羥化酶（flavonoid 3′-hydroxylase，F(xiàn)3’H）粗酶液，然后采用硫酸銨分級沉淀、透析、二乙氨乙基（dicthylaminoethyl，DEAE）-纖維素離子交換層析及Sephadex G-100凝膠過濾層析進行分離純化，最終所得純化酶的純化倍數(shù)達到14.01，比活力提高到478.49 U/mg，回收率為6.38%。通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamidegel electrophoresis，SDS-PAGE）進行純度鑒定，已達到電泳純，測定得到其分子質量約為53.09 kD。純化酶F3′H的最適溫度為30 ℃，最適pH值為7.5；以柚皮素作為底物，測得該酶的米氏常數(shù)（Km）為1.08 mmol/L，最大反應速率（vmax）為416.67 U/（min·mL）；對于酶活性，高濃度的Na＋表現(xiàn)出微弱的抑制作用，Ca2＋和檸檬酸具有強烈的抑制作用，而Fe2＋、Mg2＋、NADPH和VC卻表現(xiàn)出強烈的激活作用。
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