領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
應(yīng)用IEDB、DNAStar、DNAMAN和SnapGene等生物信息學(xué)工具對草莓輕型黃邊病毒外殼蛋白的氨基酸殘 基序列進行分析。選擇一段抗原性較強的肽段（位于外殼蛋白27～38氨基酸殘基處），依據(jù)大腸桿菌（Escherichia coli）的密碼子偏好性化學(xué)合成了該肽段的DNA編碼序列（AE）。AE片段克隆至E. coli表達載體pET32a（＋） 的EcoRⅠ和XhoⅠ位點，獲得重組質(zhì)粒pET32a（＋）-AE。含AE片段的開放閱讀框長561 bp，編碼了一個187氨 基酸殘基的重組融合蛋白，理論分子質(zhì)量為20.29 kD。重組質(zhì)粒pET32a（＋）-AE分別在E. coli BL21（DE3）和 E. coli Rosetta中進行了誘導(dǎo)表達和條件優(yōu)化。重組融合蛋白在E. coli Rosetta中的最佳表達條件為1.5 mmol/L異丙 基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）、35 ℃誘導(dǎo)表達2 h，產(chǎn)率為13.22 mg/L；在 E. coli BL21（DE3）中的最佳表達條件是為0.5 mmol/L IPTG、30 ℃誘導(dǎo)表達2 h，產(chǎn)率為9.55 mg/L。重組融合蛋白 經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、質(zhì)譜鑒定表明，其含有所預(yù)測的草莓輕型黃邊病毒外殼蛋白抗原表 位肽段AE。AE重組融合蛋白經(jīng)Ni2＋親和色譜純化、EK酶切、分子篩除去融合蛋白標(biāo)簽后，免疫產(chǎn)蛋雞。從免疫雞 所產(chǎn)雞蛋中提取雞卵黃免疫球蛋白（immunoglobulin of yolk，IgY），Dot-Blot檢測抗體結(jié)合活性。結(jié)果表明，所提 取的IgY可特異性識別AE肽段和SMYEV外殼蛋白。這一結(jié)果表明所預(yù)測的AE肽段具有較好的免疫原性。
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