領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為實現(xiàn)從L-谷氨酸到α-酮戊二酸（α-ketoglutaric acid，α-KG）的高效生物轉(zhuǎn)化，將來源于白絲北里孢菌（Kitasatospora setae KM-6054）的L-谷氨酸氧化酶（L-glutamate oxidase，LGOX）在大腸桿菌（Escherichia coli）中實現(xiàn)異源表達，并研究其酶學特性。根據(jù)LGOX的氨基酸序列和大腸桿菌系統(tǒng)偏好性合成LGOX全基因序列，并通過pET28a（＋）/DE3系統(tǒng)在大腸桿菌中實現(xiàn)了功能表達。誘導劑異丙基硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）終濃度為0.1?mmol/L，20?℃誘導18?h，重組大腸桿菌粗酶液酶活力可達49.10?U/mL。親和層析獲得酶比活力為45.98?U/mg純酶，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳條帶顯示蛋白分子質(zhì)量大小約為70?kDa。酶學性質(zhì)研究表明：其最適反應溫度和pH值分別為40?℃和6.0；Km值為1.23?mmol/L，Vmax值為76.24?μmol/（min·mg），L-谷氨酸為該酶的最適底物。本研究確定了LGOX在E.?coli?BL21中的異源表達及酶學特性，為生物轉(zhuǎn)化合成α-KG提供了新的參考途徑。
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