領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
采用降落聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（touchdown polymerase chain reaction，TD-PCR）技術(shù)，從2-酮基葡萄糖酸工業(yè)生產(chǎn)菌株變形假單胞菌JUIM01中克隆了編碼2-酮基葡萄糖酸差向異構(gòu)酶的基因kguE。將目的基因與質(zhì)粒pET-28a（＋）重組后轉(zhuǎn)入宿主表達(dá)菌中，獲得了重組菌株大腸桿菌BL21（DE3）/pET-28a（＋）-kguE。在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷的誘導(dǎo)下，該重組菌株表達(dá)了一個(gè)分子質(zhì)量約為30.5?ku的融合蛋白，且該蛋白的Western-blot鑒定結(jié)果顯示為陽(yáng)性。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，該蛋白是一種由256?個(gè)氨基酸殘基組成的分子質(zhì)量為28.5?ku的親水性蛋白，與惡臭假單胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向異構(gòu)酶在氨基酸序列上的一致性達(dá)78%，定位于細(xì)胞質(zhì)中，其二級(jí)結(jié)構(gòu)中α-螺旋、延伸鏈和無(wú)規(guī)則卷曲所占的比例分別為40.62%、17.19%和42.19%。本研究結(jié)果為變形假單胞菌2-酮基葡萄糖酸差向異構(gòu)酶的功能研究提供了一定理論支持。
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