領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
依據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性，設(shè)計(jì)合成β2腎上腺素受體（β2 adrenergic receptor，β2AR）基因序列，應(yīng)用大腸桿菌無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行高效表達(dá)，經(jīng)負(fù)載鎳離子的順磁顆粒MagneHis? Ni-Particles純化后，對(duì)受體蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）和活性鑒定。結(jié)果表明：改造后的β2AR基因密碼子適應(yīng)指數(shù)（codon adaptation index，CAI）為0.96，GC含量從58%降低到46.17%，更有利于該基因在大腸桿菌系統(tǒng)中的表達(dá)。表達(dá)體系中優(yōu)化后的Mg2＋濃度為22?mmol/L，此時(shí)表達(dá)量為1 250 μg/mL。SDS-PAGE分析顯示，純化蛋白在47?kDa左右出現(xiàn)清晰的特異性條帶，與預(yù)期結(jié)果一致，純度大于90%。直接酶受體分析檢測(cè)結(jié)果顯示，當(dāng)純化受體蛋白1∶500稀釋包被時(shí)，該重組受體與鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇及萊克多巴胺的酶標(biāo)記物結(jié)合的OD值分別為0.976、0.836和0.728，親和活性依次降低。β2AR蛋白在無(wú)細(xì)胞體系中的成功表達(dá)，為研發(fā)基于受體的β激動(dòng)劑多殘留快速檢測(cè)技術(shù)提供了理論支持。
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