領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
從解肝磷脂土地桿菌（Pedobacter heparinus）基因組DNA擴(kuò)增獲得兩個(gè)α-L-鼠李糖苷酶基因PhRha78E和PhRha78G，構(gòu)建于表達(dá)載體pET-28a；將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）進(jìn)行異源表達(dá)，PhRha78E和PhRha78G以不溶性包涵體形式大量表達(dá)于沉淀中，每克菌體可分別獲得0.42?g和0.39?g含目的酶包涵體的沉淀。酶活實(shí)驗(yàn)顯示二者的不溶性包涵體具有催化活性，可以催化水解底物對(duì)硝基苯酚-α-L-吡喃鼠李糖苷（p-nitrophenol-α-L-rhamnopyranoside，PNPR），表明二者在大腸桿菌中以催化活性包涵體形式異源表達(dá)。PhRha78E和PhRha78G的最適反應(yīng)pH值相近，分別為6.5和7.0，PhRha78E在酸性pH?4.8仍能保持62%酶活力，而PhRha78G在堿性pH?8.6依然保持72%酶活力；PhRha78E和PhRha78G的最適反應(yīng)溫度卻相差很大，分別為60?℃和40?℃，PhRha78E在高溫70?℃條件下仍能保持69%酶活力，而PhRha78G在低溫20?℃條件下仍有43%酶活力；動(dòng)力學(xué)常數(shù)kcat分別為0.18?s－1和0.12?s－1，Km分別為0.55?mmol/L和0.40?mmol/L。本研究揭示新型α-L-鼠李糖苷酶PhRha78E和PhRha78G在大腸桿菌中以催化活性包涵體形式異源表達(dá)，蛋白表達(dá)量大，二者酶學(xué)性質(zhì)差異較大，可應(yīng)用于不同的生物催化領(lǐng)域，并豐富了現(xiàn)有α-L-鼠李糖苷酶資源庫(kù)。
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