領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
通過在乳酸乳球菌（Lactobacillus lactis）NZ9000外源添加一定濃度的γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid，GABA）和表達(dá)可以合成GABA的谷氨酸脫羧酶（glutamic acid decarboxylase，GAD）兩種方式，研究L. lactis NZ9000在酸脅迫和冷凍脅迫下的表現(xiàn)。結(jié)果表明：外源添加GABA的手段對(duì)于L. lactis NZ9000在酸脅迫和冷凍脅迫下的生長沒有明顯幫助。與之相反，通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)克隆茶樹中的CsGAD，構(gòu)建pNZ8148-CsGAD表達(dá)載體，可獲得高效表達(dá)GAD的基因工程重組菌L.?lactis?NZ9000/pNZ8148-CsGAD。經(jīng)2?ng/mL乳酸鏈球菌素（Nisin）誘導(dǎo)8?h后，高效液相色譜檢測(cè)表明重組菌合成GABA能力提高5?倍以上。生長曲線測(cè)定結(jié)果表明，正常培養(yǎng)條件下，重組菌到達(dá)對(duì)數(shù)生長平臺(tái)期的時(shí)間較對(duì)照菌延長，到達(dá)穩(wěn)定期的最大生物量（OD600?nm）提高至對(duì)照菌的1.5?倍；在pH?4.0的酸性培養(yǎng)條件下，對(duì)照菌基本不生長，而重組菌仍保持一定的生長力。低溫脅迫實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)至穩(wěn)定期后期的乳酸菌抗凍能力和存活率均要高于對(duì)數(shù)期中期和穩(wěn)定期前期2?個(gè)培養(yǎng)階段，且不同培養(yǎng)階段中，重組菌的存活率均高于對(duì)照菌1～2?個(gè)數(shù)量級(jí)。綜上所述，重組的L.?lactis?NZ9000/pNZ8148-CsGAD能夠通過食品級(jí)異源表達(dá)CsGAD產(chǎn)生的GABA顯著提高乳酸菌抗酸和抗冷凍脅迫的能力。本研究為探索研究乳酸菌抗脅迫機(jī)理、改良乳酸菌生長狀態(tài)以利于其工業(yè)化用途的擴(kuò)展提供了參考。
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