領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
利用黑曲霉自身強(qiáng)啟動(dòng)子（葡萄糖淀粉酶啟動(dòng)子，PglaA）實(shí)現(xiàn)了酸性果膠裂解酶PelD在黑曲霉中的過(guò)量表達(dá)，重組酸性果膠裂解酶經(jīng)鎳柱親和層析純化后進(jìn)行Western blot鑒定及酶學(xué)性質(zhì)研究。重組酸性果膠裂解酶在搖瓶發(fā)酵條件下最高酶活力達(dá)到8?822.6?U/mL；經(jīng)一步純化后，該重組酶的比活力為8?522.7?U/mg，回收率為79.4%；該重組酶的最適反應(yīng)pH值為5.0，在pH?3.0～6.5范圍內(nèi)40?℃保溫2?h仍能保持50%以上的相對(duì)酶活力，在酸性pH值下穩(wěn)定性良好；最適反應(yīng)溫度為50?℃，該重組酶在30～50?℃的范圍內(nèi)非常穩(wěn)定；在1?mmol/L濃度下，Ca2＋、Mg2＋、Cu2＋、Zn2＋、Ni2＋、Mn2＋、Ba2＋對(duì)該重組酶具有激活作用，其中Zn2＋、Ni2＋、Ba2＋激活作用較為顯著，而十二烷基硫酸鈉表現(xiàn)為抑制作用；底物特異性分析表明該酶能夠特異性地降解高度甲酯化果膠，其對(duì)柑橘果膠（酯化度≥85%）酶活力高達(dá)31?248.0?U/mL；此外，重組酶對(duì)橙汁、蘋(píng)果汁和葡萄汁具有良好的澄清效果，其中橙汁的透光度提高了16.9?倍，蘋(píng)果汁的透光度提高了10.5?倍，葡萄汁的透光度提高了4.7?倍。
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