領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫公布的腸膜明串珠菌ATCC 12291中蔗糖磷酸化酶基因序列，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pQE-lmsp。在大腸桿菌Escherichia coli M15/pREP4中誘導(dǎo)表達(dá)，鎳親和層析純化蛋白，進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定和重組酶轉(zhuǎn)糖苷活性的研究。以蔗糖為底物對(duì)LMsp進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)分析，其最適溫度和最適pH值分別為40?℃和6.5；Km值和Vmax值分別為（34.16±1.219）mmol/L和（370.5±6.049）μmol/（mg·min）。當(dāng)以葡萄糖-1-磷酸為供體時(shí)，對(duì)于大多數(shù)單糖及其糖醇類受體均具有轉(zhuǎn)糖苷活性，尤其對(duì)L-阿拉伯糖具有75%的轉(zhuǎn)化效率。然后通過對(duì)LMsp進(jìn)行同源建模和氨基酸序列比對(duì)分析，進(jìn)行分子改造，并比較酶學(xué)性質(zhì)及轉(zhuǎn)糖苷活性的變化。獲得7?個(gè)單點(diǎn)和聯(lián)合的突變體T180A、T219V、P236S、T180A-T219V、T180A-P236S、T219V-P236S、T180A-T219V-P236S，其中突變體T180A、P236S對(duì)L-山梨糖的轉(zhuǎn)糖苷活性分別有13.7%和15%的提高。本研究通過對(duì)LMsp的研究，發(fā)現(xiàn)其具有良好的酸堿穩(wěn)定性和對(duì)L-阿拉伯糖的高轉(zhuǎn)糖苷活性，并且獲得了對(duì)于L-山梨糖轉(zhuǎn)糖苷活性提高的突變體，豐富了有關(guān)于蔗糖磷酸化酶的性質(zhì)，并且對(duì)該酶的分子改造提供了經(jīng)驗(yàn)依據(jù)。
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