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基于可視化環(huán)介導等溫擴增技術快速檢測金黃色葡萄球菌
來源:食品科學網 閱讀量: 236 發(fā)表時間: 2019-10-30
作者: 郭建平,萬佳佳,陸兆新,呂鳳霞,張充,趙海珍,別小妹
關鍵詞: 可視化;環(huán)介導等溫擴增技術;檢測;金黃色葡萄球菌;羥基萘酚藍
摘要:

應用環(huán)介導等溫擴增技術(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于顏色判定的快速、靈敏的金黃色葡萄球菌檢測方法。根據金黃色葡萄球菌特異性靶基因SAR0395設計LAMP引物,建立可視化LAMP檢測方法。優(yōu)化的反應體系為:1.6?μmol/L內引物(FIP和BIP),0.2?μmol/L外引物(F3和B3),4.0?mmol/L MgSO4,1.0?mmol/L?dNTPs,0.4?U/μL?Bst?2.0?WarmStart??DNA聚合酶,120?μmol/L羥基萘酚藍,擴增溫度60?℃,擴增時間60?min。在可視化LAMP體系中添加兩條環(huán)引物(LF和LB)反應時間可縮短至20?min。該可視化LAMP反應60?min,其基因組靈敏度可以達到0.010?3?fg/μL,菌落靈敏度可以達到1.9?CFU/mL;利用46?株金黃色葡萄球菌和24?株非金黃色葡萄球菌證實該可視化LAMP具有良好的特異性和可靠性。本研究中建立的可視化LAMP可為金黃色葡萄球菌的快速檢測提供一種新的技術。

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