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—— 中國食品雜志社
為開發(fā)一種雙孢蘑菇兩種不同形態(tài)多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）的提取純化方法，通過溫度誘導相分配、分步硫酸銨沉淀鹽析、DEAE陰離子交換層析，對雙孢蘑菇中的可溶態(tài)PPO（soluble PPO，sPPO）和膜結(jié)合態(tài)PPO（membrane-bound PPO，mPPO）進行分離純化，并通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳和Native-聚丙烯酰氨凝膠電泳及米氏方程對純化后兩種形態(tài)PPO的純度、分子質(zhì)量及酶促反應動力學進行探究。雙孢蘑菇sPPO和mPPO經(jīng)純化后對鄰苯二酚的比活力分別達到6 912.88 U/mg和19 092.94 U/mg，相比于粗酶液，酶的比活力分別提高到12.20 倍和10.86 倍，且純化后mPPO的比活力顯著高于sPPO。酶促反應動力學結(jié)果顯示，sPPO和mPPO對不同底物的催化活性差異較大，對底物鄰苯二酚的催化活性較高，且mPPO比sPPO對底物鄰苯二酚的親和力更強，酶促反應速度更高。sPPO和mPPO對鄰苯二酚的最適反應溫度均為30 ℃，最適pH值均為6.8。本研究為雙孢蘑菇兩種狀態(tài)PPO的質(zhì)譜鑒定、酶學特性以及抑制酶促褐變的發(fā)生等研究奠定了基礎(chǔ)。
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