為提升Nakazawaea ishiwadae GDMCC 60786產(chǎn)乙酸乙酯的能力,通過物理誘變常壓室溫等離子體和化學(xué)誘變甲基磺酸乙酯、亞硝基胍篩選突變菌株。利用三丁酸甘油酯初篩、搖瓶發(fā)酵二篩和外加底物發(fā)酵三篩。同時,對突變菌株進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性、溶血性和耐藥性體外安全性評價。結(jié)果表明:對出發(fā)菌株進(jìn)行誘變處理,最終獲得1 株高產(chǎn)乙酸乙酯、遺傳穩(wěn)定性良好及體外安全性良好的突變菌株N5,將該誘變菌連續(xù)傳代5 次,得到乙酸乙酯含量的平均值為764.52 mg/L,葡萄糖轉(zhuǎn)化率達(dá)到38.22%,與出發(fā)菌株相比,乙酸乙酯提高了1.90 倍,葡萄糖轉(zhuǎn)化率提高了25.03%。外加乙醇后,突變菌株N5乙酸乙酯質(zhì)量濃度為1 426.81 mg/L;但外加乙酸后,該菌株不生長,并失去產(chǎn)酯能力,表明其對乙醇耐受性強(qiáng)于乙酸。同時發(fā)現(xiàn)24 h時,突變菌株N5的酯酶、乙酰輔酶A和醇酰基轉(zhuǎn)移酶活性均達(dá)到最大值。本研究構(gòu)建了一套適用于該菌株的誘變體系。
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