領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
針對(duì)副溶血性弧菌主要毒素編碼基因（tdh和trh），基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技術(shù)，以毛細(xì)管為反應(yīng)介質(zhì)，建立一種微量（5 μL）、特異、靈敏、低成本、可視化、快速檢測(cè)的毛細(xì)管LAMP（capillary LAMP，cLAMP）。本研究針對(duì)每個(gè)靶標(biāo)基因分別設(shè)計(jì)6 條特異性引物，系統(tǒng)優(yōu)化Mg2＋、dNTPs濃度和Bst DNA聚合酶使用量，以及反應(yīng)時(shí)間及反應(yīng)溫度等參數(shù)，確立最適cLAMP反應(yīng)體系；測(cè)定該方法的靈敏度和特異性。結(jié)果表明：優(yōu)化后的5 μL cLAMP反應(yīng)體系為6 mmol/L或8 mmol/L Mg2＋，1.44 mmol/L或1.28 mmol/L dNTPs、0.096 U/μL Bst DNA聚合酶、反應(yīng)溫度65 ℃、反應(yīng)時(shí)間60 min。針對(duì)靶基因tdh和trh，cLAMP方法檢測(cè)副溶血性弧菌基因組DNA的最低檢測(cè)限分別為3 fg/μL和34 fg/μL，純培養(yǎng)物的最低檢測(cè)限分別為9.85×103 CFU/mL和8.25×105 CFU/mL；且與其他6 種常見致病菌（霍亂弧菌、創(chuàng)傷弧菌、溶藻弧菌、嗜水氣單胞菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌）均無(wú)交叉反應(yīng)。本研究建立的微量、可視化cLAMP方法為食源性致病菌副溶血性弧菌檢測(cè)試劑盒的研發(fā)提供了技術(shù)支撐。
2023年第44卷 2022年第43卷 2021年第42卷 2020年第41卷 2019年第40卷 2018年第39卷 2017年第38卷 2016年第37卷 2015年第36卷 2014年第35卷 2013年第34卷 2012年第33卷 2011年第32卷 2010年第31卷 2009年第30卷 2008年第29卷 2007年第28卷 2006年第27卷 2005年第26卷 2004年第25卷 2003年第24卷 2002年第23卷 2001年第22卷 2000年第21卷 1999年第20卷 1998年第19卷 1997年第18卷 1996年第17卷 1995年第16卷 1994年第15卷 1993年第14卷 1992年第13卷 1991年第12卷 1990年第11卷 1989年第10卷 1988年第09卷 1987年第08卷 1986年第07卷 1985年第06卷 1984年第05卷 1983年第04卷 1982年第03卷 1981年第02卷 1980年第01卷
電話: 010-87293157
地址: 北京市豐臺(tái)區(qū)洋橋70號(hào)
版權(quán)所有 @ 2023 中國(guó)食品雜志社 京公網(wǎng)安備11010602060050號(hào) 京ICP備14033398號(hào)-2
