領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
通過(guò)定點(diǎn)突變技術(shù)，提高高絲氨酸脫氫酶（homoserine dehydrogenase，HSD）的催化活性，減少通路中代謝產(chǎn)物對(duì)其產(chǎn)生的反饋抑制和阻遏作用。對(duì)HSD與底物高絲氨酸分子進(jìn)行對(duì)接，通過(guò)其空間結(jié)構(gòu)分析，選擇Asp61和Gly25兩個(gè)關(guān)鍵位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)飽和突變，通過(guò)酶活力篩選，發(fā)現(xiàn)突變體A61L和G25G較野生型（wild type，WT）酶活力顯著提高。對(duì)這兩個(gè)突變體進(jìn)行酶動(dòng)力學(xué)和酶學(xué)性質(zhì)研究，結(jié)果顯示：相較于WT，A61L和G25G的Km值降低，底物親和力增強(qiáng)，酶活力分別提高到1.21、1.35 倍；n值減小，正協(xié)同性增加；A61L和G25G最適溫度與WT相同均為40 ℃；A61L最適pH值與WT相同為8.0，G25G最適pH值為8.5較WT提高；A61L和G25G酶活力半衰期較WT分別延長(zhǎng)1 h和減少0.5 h；低濃度K＋、Mg2＋、Ca2＋對(duì)突變體和WT有激活作用；不同體積分?jǐn)?shù)甲醇、乙醇、乙腈和二甲基亞砜對(duì)突變體和WT有明顯抑制作用；在1～25 mmol/L抑制劑濃度下，突變體受抑制作用較WT明顯減弱。本研究獲得酶活力提高、別構(gòu)抑制減弱的突變體G25G和A61L，為優(yōu)化HSD合成代謝途徑和構(gòu)建高產(chǎn)蛋氨酸、蘇氨酸和異亮氨酸菌株提供了參考。
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