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—— 中國食品雜志社
離子液體雙水相提取木瓜蛋白酶有較高的提取率和簡便的操作流程，構(gòu)建合適的離子液體雙水相是提取木瓜蛋白酶的研究熱點。鑒于此，本實驗通過熒光光譜分析、分子對接和離子液體雙水相體系分配系數(shù)測定等方法，研究離子液體與木瓜蛋白酶相互作用的機(jī)制。熒光光譜分析結(jié)果表明，在疏水作用力驅(qū)動下1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽（[C4mim]BF4）和1-丁基氯化吡啶（[C4Py]Cl）離子液體可與木瓜蛋白酶發(fā)生靜態(tài)熒光猝滅，結(jié)合生成復(fù)合物，結(jié)合位點數(shù)均為1，且[C4Py]Cl離子液體的吉布斯自由能高于[C4mim]BF4離子液體。分子對接結(jié)果進(jìn)一步表明，離子液體的結(jié)合部位位于木瓜蛋白酶中間活性區(qū)域的疏水凹槽中，并與周圍眾多的氨基酸殘基存在疏水作用、范德華力和π-π相互作用等非共價鍵力。離子液體雙水相體系分配系數(shù)測定結(jié)果表明，在實際萃取木瓜蛋白酶的過程中，相同條件下[C4Py]Cl離子液體的萃取效果優(yōu)于[C4mim]BF4離子液體，與熒光光譜和分子對接所得結(jié)果相同，即[C4Py]Cl離子液體與木瓜蛋白酶的吉布斯自由能高于[C4mim]BF4離子液體與木瓜蛋白酶的吉布斯自由能，熒光光譜、分子對接、分配系數(shù)測定的結(jié)果都很好地相互關(guān)聯(lián)。本研究對于篩選合適離子液體構(gòu)建提取木瓜蛋白酶的雙水相萃取體系具有一定的理論指導(dǎo)作用。
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