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—— 中國食品雜志社
為獲得高活性功能多肽，實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)蛋白資源的高值化利用，本研究在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合響應(yīng)面試驗(yàn)，優(yōu)化金槍魚暗色肉胰蛋白酶與堿性蛋白酶雙酶酶解條件。將所得的酶解液通過基質(zhì)輔助激光解離飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行多肽分子質(zhì)量測定，利用Discovery Studio中CDocker模塊對其中的優(yōu)勢肽進(jìn)行功能預(yù)測，并進(jìn)一步采用體外活性實(shí)驗(yàn)比較酶解液和合成多肽對1,1-二苯基-2-苦基肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除活性和對血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）抑制活性的差異。結(jié)果表明，金槍魚暗色肉在雙酶質(zhì)量比1∶1、固液比1∶4、加酶量2%、酶解溫度51 ℃和酶解時間5 h條件下，獲得61.01%的最佳水解度。經(jīng)分子對接發(fā)現(xiàn)，優(yōu)勢肽為VSSK和EPR，可與具有抗氧化功能相關(guān)的Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）和降血壓相關(guān)的ACE對接。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明酶解液的DPPH半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）為0.204 mg/mL，ACE IC50為2.321 mg/mL；合成多肽VSSK的DPPH IC50為3.050 mg/mL，ACE IC50為2.914 mg/mL；合成多肽EPR的DPPH IC50為3.368 mg/mL，ACE IC50為4.857 mg/mL；酶解液比合成多肽具有更好的抗氧化活性和ACE抑制活性。本研究結(jié)果可為金槍魚暗色肉高值化利用提供理論參考。
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