領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
對1 株沙門氏菌短尾噬菌體LPST144的尾纖維進行序列結(jié)構(gòu)分析和表達(dá)純化，成功驗證其尾纖維基因orf38表達(dá)產(chǎn)物gp38的特異性受體結(jié)合活性，從而得到一個潛在的沙門氏菌檢測探針。首先采用生物信息學(xué)的方法分析LPST144噬菌體尾纖維gp38的氨基酸序列、理化性質(zhì)、遺傳進化關(guān)系和C末端二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明：LPST144的尾纖維包含646 個氨基酸殘基，N端具有2 個保守結(jié)構(gòu)域，且與T7噬菌體相似度較高；而C末端序列差異極大，存在大量的β-折疊結(jié)構(gòu)，與T7噬菌體尾纖維C末端二級結(jié)構(gòu)類似。gp38具有噬菌體受體結(jié)合蛋白的多個特點：具有模塊化的性質(zhì)、序列相似性低且C末端富含β-折疊結(jié)構(gòu)。進一步將尾纖維基因orf38進行異源表達(dá)、純化，采用全菌包被的酶聯(lián)免疫吸附法檢測其特異性結(jié)合宿主鼠傷寒沙門氏菌ATCC13311的能力，結(jié)果表明實驗組的吸光度為0.94±0.02，陰性對照組吸光度為0.17±0.01，對宿主菌具有較強的結(jié)合能力；且gp38重組蛋白與實驗中受試的其他6 株不同血清型的沙門氏菌均能結(jié)合；采用大腸桿菌T10、沙門氏菌外膜蛋白、金黃色葡萄球菌6538及磷酸鹽緩沖液代替宿主菌作為對照，吸光度分別為0.58±0.03、0.56±0.01、0.59±0.03和0.53±0.005，實驗組與對照組結(jié)果具有顯著差異，表明尾纖維gp38具有特異性結(jié)合宿主鼠傷寒沙門氏菌ATCC13311以及實驗中其他受試沙門氏菌的能力。本研究可為開發(fā)基于噬菌體受體結(jié)合蛋白為分子探針建立沙門氏菌檢測方法奠定實驗基礎(chǔ)。
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