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—— 中國食品雜志社
噬夏孢歐文氏菌(Erwinia uredovora)可以累積類胡蘿卜素,合成過程涉及的一系列反應(yīng)都是在相關(guān)酶的催化下完成的,其中番茄紅素環(huán)化酶由基因crtY編碼,催化由番茄紅素轉(zhuǎn)化為β-胡蘿卜素的酶促反應(yīng)。本研究以噬夏孢歐文氏菌基因組DNA為模板,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增獲得crtY基因,測序正確后克隆進(jìn)表達(dá)載體pET-15b,構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pET-15b-crtY,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E．coli BL21(DE3),構(gòu)建工程菌,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,重組番茄紅素環(huán)化酶在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá),通過鎳離子樹脂親和層析和Superdex 75凝膠過濾層析,得到了電泳純的重組噬夏孢歐文氏菌番茄紅素環(huán)化酶,該蛋白體外具有催化番茄紅素轉(zhuǎn)化為β-胡蘿卜素的活性。
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