領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
為獲得高產(chǎn)共軛亞油酸（conjugated linoleic acid，CLA）的菌株，對(duì)亞油酸異構(gòu)酶系植物乳桿菌的肌球蛋白交叉反應(yīng)抗原（myosin-cross-reactive antigen，MCRA）基因mcra和痤瘡丙酸桿菌的亞油酸異構(gòu)酶基因lai-p進(jìn)行克隆，克隆成功后連接到骨架質(zhì)粒pCold-SUMO上構(gòu)建兩種含mcra基因和lai-p基因的大腸桿菌重組菌株，利用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷低溫誘導(dǎo)陽(yáng)性重組菌蛋白表達(dá)，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證得到目的蛋白表達(dá)條帶，說(shuō)明兩種基因表達(dá)成功。采用易錯(cuò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)定向進(jìn)化mcra基因和lai-p基因，構(gòu)建重組菌突變體庫(kù)，利用流式細(xì)胞術(shù)分選獲得吸光度提高和CLA產(chǎn)量提高的重組菌株，其中pCold-ycmcra-gfp重組菌243 株，吸光度最高的為155號(hào)菌1.050 6±0.000 4，提高了5.02 倍；pCold-yclai-p-gfp重組菌156 株，產(chǎn)量最高的為39號(hào)菌（11.62±0.003 6）μg/mL，提高了2.99 倍。本研究為后期深入了解突變菌株CLA產(chǎn)量提高的原因，并獲得兩種亞油酸異構(gòu)酶的產(chǎn)酶機(jī)制奠定了一定基礎(chǔ)。
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