領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
利用DNA環(huán)介導(dǎo)恒溫核酸擴(kuò)增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)設(shè)計(jì)一對(duì)外引物和一對(duì)內(nèi)引物,通過(guò)引物特異性識(shí)別tlh基因上的六個(gè)獨(dú)立區(qū)域來(lái)快速檢測(cè)副溶血弧菌。同時(shí)將檢測(cè)結(jié)果與PCR方法進(jìn)行比較。結(jié)果表明,LAMP反應(yīng)在65℃恒溫條件60min內(nèi)完成,凝膠電泳呈現(xiàn)梯型條帶;肉眼觀察陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象,添加1×SYBRGreenI熒光染料后,綠色的陽(yáng)性結(jié)果很明顯區(qū)別于橙色陰性結(jié)果;LAMP方法的最低檢出限為10CFU/ml,PCR方法為103CFU/ml,LAMP方法檢測(cè)靈敏度是PCR方法的100倍。因此,LAMP方法用于快速檢測(cè)副溶血弧菌具有檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單、反應(yīng)結(jié)果肉眼即辨別并且靈敏度高特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)裝置簡(jiǎn)便,能夠提供穩(wěn)定熱源即可,所以LAMP方法特別適合于現(xiàn)場(chǎng)快速診斷。
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