領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
本研究對(duì)6個(gè)影響雙孢蘑菇RAPD-PCR反應(yīng)的關(guān)鍵因素進(jìn)行了一系列優(yōu)化,目的在于建立理想的RAPD最佳反應(yīng)條件和反應(yīng)體系,為大量雙孢蘑菇品種間的RAPD多樣性分析做準(zhǔn)備。各關(guān)鍵因素梯度設(shè)置如下:(1)7個(gè)退火溫度梯度:33.5、36.5、38.3、40.1、43.7、45.4、48.1℃。(2)6個(gè)Mg2+濃度梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mmol/L。(3)5個(gè)Taq酶用量梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5U。(4)5個(gè)dNTPs濃度梯度:0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L。(5)5個(gè)引物濃度梯度:0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μmol/L。(6)7個(gè)模板DNA用量梯度:100、20、4、0.8、0.16、0.032、0ng。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:最佳的RAPD反應(yīng)體系為:10×buffer2.0μl、Taq酶1.5U、模板DNA4-100ng、MgCl22.0mmol/L、dNTP0.20mmol/L,引物0.3μmol/L,加ddH2O至20μl。PCR熱循環(huán)參數(shù)為94℃預(yù)變性5min;94℃變性1min,44℃退火1min50s,72℃延伸2min,循環(huán)40次;最后72℃延伸7min。
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