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水生棲熱菌Thermus aquaticus FL-03嗜熱麥芽糖轉(zhuǎn)葡萄糖基酶基因的克隆及表達
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 116 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 劉佳歡, 于寒松, 王玉華, 胡耀輝
關(guān)鍵詞: 水生棲熱菌FL-03; 麥芽糖轉(zhuǎn)葡萄糖基酶; 基因克隆; 原核表達; 純化;
摘要:

以水生棲熱菌FL-03菌株的基因組DNA為模板,PCR擴增編碼嗜熱麥芽糖轉(zhuǎn)葡萄糖基酶的基因(MalQ)片段,克隆至pET-28a(+)原核表達載體,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表達,對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE和Western blotting分析鑒定。重組蛋白經(jīng)70℃鈍化離心除雜蛋白后,經(jīng)SDS-PAGE檢測,可見單一條帶。純化酶液以10%麥芽糖為底物,經(jīng)TLC法分析表明該酶具有轉(zhuǎn)葡萄糖基的活性,比活力提高近5倍,且活力回收率達70%,具有重要的工業(yè)應用前景。

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