領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
從玉米嫩葉中提取總RNA，通過(guò)RT-PCR的方法擴(kuò)增出玉米谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(TGase)全長(zhǎng)基因，回收目的片段并測(cè)序，該基因編碼區(qū)全長(zhǎng)1605bp，編碼535個(gè)氨基酸殘基，分子量為60.9kD，與GenBank(登錄號(hào)：AJ421525)上已發(fā)表的序列同源性為100%。按正確的閱讀框架將玉米TGase基因片段定向克隆到表達(dá)載體pET-28a上，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株，1mmol/L IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)，經(jīng)凝膠分析軟件測(cè)得蛋白表達(dá)量約占總蛋白的15%，以His-Tag抗體作為一抗，采用Western-blot方法檢測(cè)目的蛋白，結(jié)果證明所表達(dá)的特異蛋白是帶有His-Tag的重組融合蛋白，利用Ni2+-NTA瓊脂糖樹(shù)脂親和層析柱純化目的蛋白，SDS-PAGE鑒定為單一條帶，測(cè)得純化后的TGase酶活力達(dá)到16U/mg。
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