領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
建立以乳清酸核苷-5＇- 磷酸脫羧酶基因(pyrG)為選擇標(biāo)志，以米曲霉為宿主菌的同源轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。以米曲霉基因組為模板，通過PCR 擴增獲得pyrG 基因，將該片段與表達(dá)載體pMD18-T 相連，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH 5α，經(jīng)藍(lán)白斑篩選、PCR 快速篩選、酶切和測序驗證，獲得重組質(zhì)粒pMD-pyrG，完成pyrG 基因的克隆。序列分析表明該基因與米曲霉KBN616 的pyrG 基因編碼序列的同源性為99.9%，兩者經(jīng)推導(dǎo)的氨基酸的同源性為99.6%。以米曲霉 pyrG 營養(yǎng)缺陷株為受體菌，通過PEG/CaCl2 誘導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入該受體菌，使米曲霉pyrG 缺陷株發(fā)生基因轉(zhuǎn)化，成為pyrG+，由此成功建立了以pyrG 為篩選標(biāo)記基因、同型米曲霉pyrG 基因缺陷株為受體菌的基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。
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