領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
通過改進(jìn)的碳二亞胺法制備環(huán)丙沙星- 牛血清白蛋白偶聯(lián)物(CIP-BSA)，用紫外掃描、十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)方法鑒定偶聯(lián)物。利用制備的CIP-BSA 偶聯(lián)物作為免疫原，免疫Balb/c 小鼠，用雜交瘤技術(shù)制備環(huán)丙沙星單克隆抗體，并對(duì)其效價(jià)、親和力和特異性進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明：CIP-BSA 的偶聯(lián)比為30:1。經(jīng)間接酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法篩選，共篩出兩株敏感、特異的雜交瘤細(xì)胞(JY-1、JY-2)。這兩株細(xì)胞的腹水經(jīng)純化后的抗體效價(jià)分別為5.12 × 106、2.56 × 106，親和力常數(shù)分別為2.88 × 109、2.46 × 109L/mol，兩抗體均為IgG1a，取親和力高的JY-1 進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)抑制測(cè)定，IC50 值可以達(dá)到9.83ng/mL。該單抗僅與恩諾沙星存在交叉反應(yīng)，交叉反應(yīng)率為95%。通過驗(yàn)證得到的JY-1 細(xì)胞株分泌的單克隆抗體可用于水產(chǎn)品中環(huán)丙沙星殘留的快速檢測(cè)。
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