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重金屬鉛多克隆抗體的制備及鑒定
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 134 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 翟一凡,向軍儉 ,唐 勇,郭常偉,劉小鋒,楊紅宇
關(guān)鍵詞: 鉛離子|合成抗原|ELISA|多克隆抗體
摘要:

目的:合成鉛離子完全抗原,并對(duì)其進(jìn)行鑒定;用合成的完全抗原免疫Balb/c 小鼠制備多克隆抗體,鑒定效價(jià)和特異性。方法:用雙功能螯合劑p-SCN-Bn-DTPA 將Pb2+ 與載體蛋白BSA 和OVA 偶聯(lián)在一起,合成免疫抗原(Pb-DTPA-BSA)和檢測抗原(Pb-DTPA-OVA),并通過SDS-PAGE、紫外掃描、電感耦合等離子體(ICP) 檢測抗原中Pb2+ 含量,以及通過免疫Balb/c 小鼠,采集血清進(jìn)行間接ELISA 和競爭ELISA 檢測。結(jié)果:兩種合成的抗原相對(duì)于各自的載體蛋白均出現(xiàn)了蛋白條帶滯后,紫外吸收峰偏移等現(xiàn)象;免疫的4 號(hào)和5 號(hào)Balb/c 小鼠的抗血清效價(jià)達(dá)1:400000;與OVA 無交叉反應(yīng),ELISA 檢測IC50 值為1.5ng/mL,與Fe3+ 有近5% 的交叉反應(yīng),與其他重金屬離子的交叉反應(yīng)均小于1%。結(jié)論:鉛離子多克隆抗體制備成功。

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