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二硫鍵穩(wěn)定的抗氯霉素單鏈抗體的構(gòu)建
來源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 121 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 李黃金，陳 偉，趙 林，柴偉佳，唐 偉
關(guān)鍵詞: 氯霉素|二硫鍵穩(wěn)定的單鏈抗體|高效表達(dá)|β- 環(huán)糊精分子伴侶|復(fù)性
摘要:

為構(gòu)建一種食品殘留檢測(cè)用二硫鍵穩(wěn)定的抗氯霉素單鏈抗體(sdsFvCAP)。以抗氯霉素抗體可變區(qū)基因?yàn)槟０澹ㄟ^引物突變PCR 在輕鏈和重鏈的可變區(qū)分別引入一個(gè)半胱氨酸定點(diǎn)突變，以重疊延伸PCR 組裝成sdsFvCAP。在大腸桿菌系統(tǒng)強(qiáng)啟動(dòng)子T7 驅(qū)動(dòng)下，sdsFvCAP 基因不能單獨(dú)表達(dá)，而通過同義突變降低其5＇端序列GC 含量則可實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物主要以包涵體形式存在，經(jīng)β- 環(huán)糊精分子伴侶系統(tǒng)復(fù)性可獲得親和力與母本抗體相似的sdsFvCAP。所構(gòu)建的sdsFvCAP 具有取代單克隆抗體用于氯霉素殘留檢測(cè)的潛力。

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