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金黃色葡萄球菌RAA-LFD快速檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 300 發(fā)表時(shí)間: 2022-03-23
作者: 后來(lái)旺,李達(dá)容,鄧波,趙勇,潘迎捷,豐東升,孫曉紅
關(guān)鍵詞: 金黃色葡萄球菌;重組酶等溫?cái)U(kuò)增技術(shù);側(cè)流層析試紙條;快速檢測(cè)
摘要:

靶向金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)保守基因(nuc)序列設(shè)計(jì)特異性引物,經(jīng)引物篩選和反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立金黃色葡萄球菌的重組酶等溫?cái)U(kuò)增(recombinase aided amplification,RAA)結(jié)合側(cè)流層析試紙條(lateral flow dipstick,LFD)的快速檢測(cè)方法。該方法在引物濃度200 nmol/L、33 ℃反應(yīng)20 min即可實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)基因片段的有效擴(kuò)增。特異性分析結(jié)果表明RAA-LFD方法檢測(cè)金黃色葡萄球菌與其他常見(jiàn)致病菌菌株間不存在交叉反應(yīng),靈敏度分析結(jié)果表明RAA-LFD方法檢測(cè)金黃色葡萄球菌的檢出限為4 fg/μL(DNA)與1.83×102 CFU/mL(純菌液)。用人工污染牛奶樣品驗(yàn)證RAA-LFD方法的可靠性,結(jié)果顯示在增菌6 h時(shí),RAA-LFD方法可檢測(cè)到1.83×101 CFU/mL金黃色葡萄球菌。分別采用微生物生化鑒定法、PCR法與RAA-LFD方法對(duì)64 份牛奶樣品進(jìn)行金黃色葡萄球菌檢測(cè),結(jié)果表明,RAA-LFD方法與微生物生化鑒定法總符合率為95.3%,與PCR法總符合率(98.4%)表現(xiàn)出較高的一致性。本研究建立的可視化檢測(cè)方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速高效、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果直觀、對(duì)儀器設(shè)備要求低等特點(diǎn),為牛奶中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)提供新的發(fā)展方向。

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