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熒光染料EMA在實(shí)時熒光PCR定量檢測海產(chǎn)品中致病性副溶血弧菌活細(xì)胞中的應(yīng)用
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 178 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 祝儒剛
關(guān)鍵詞: 疊氮溴乙錠(EMA)|實(shí)時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)|海產(chǎn)品|活細(xì)胞|副溶血弧菌檢測
摘要:

將熒光染料--疊氮溴乙錠(ethidium bromide monoazide,EMA)與實(shí)時熒光-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)技術(shù)相結(jié)合,對其在RT-PCR定量檢測海產(chǎn)品中致病性副溶血弧菌活細(xì)胞中的應(yīng)用進(jìn)行研究。純培養(yǎng)條件下,在2.2×102~2.2×107CFU范圍內(nèi)細(xì)胞數(shù)的常用對數(shù)值與Ct值之間呈嚴(yán)格的負(fù)相關(guān)性,并且不添加EMA時的檢測靈敏度(22CFU)略大于添加EMA(2.2×102CFU)時的檢測靈敏度;人工污染牡蠣樣品,利用RT-PCR和EMA RT-PCR以及平板計數(shù)法分別進(jìn)行副溶血弧菌定量檢測,結(jié)果表明EMA RT-PCR更接近于平板計數(shù)的結(jié)果,單純RT-PCR定量的結(jié)果偏大;在采集的45份海產(chǎn)品樣品中,不經(jīng)富集培養(yǎng),利用EMA RT-PCR方法僅有一份牡蠣樣品呈陽性,牡蠣樣品污染程度為114CFU/g。該方法能夠快速、靈敏、準(zhǔn)確地進(jìn)行海產(chǎn)品中致病性副溶血弧菌活細(xì)胞的定量檢測,具有很好的應(yīng)用價值。

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