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—— 中國食品雜志社
目的：研究絲狀噬菌體基因V蛋白(gene V protein，GVP)基因的合成、重組表達及其功能。方法：根據GVP的基因序列，選擇大腸桿菌偏愛的密碼子，設計合成了8個寡核苷酸片段，利用重疊延伸PCR合成GVP基因序列，將其與原核表達載體pET-28a-c(＋)質粒重組，轉化大腸桿菌，獲得GVP蛋白陽性表達菌株，異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導表達，產物經Ni+-NTA瓊脂糖凝膠層析純化，獲得目的蛋白GVP，DNA結合實驗檢測其功能。結果：成功合成出GVP基因，重組體在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導獲得高效表達，DNA結合實驗表明GVP與單鏈DNA間解離平衡常數Kd=7.27×10-5mol/L。結論：重組構建并高效表達的GVP蛋白具有較高單鏈DNA結合能力，可用于食品病原微生物特定單鏈DNA分子的濃縮和分離。
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