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白粿干模擬轉(zhuǎn)基因樣品前處理與熒光PCR檢測(cè)體系的優(yōu)化
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 147 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 張 冰,王志純,邵碧英,繆婷玉,彭 娟,陳文炳
關(guān)鍵詞: 米制品(白粿干);轉(zhuǎn)基因成分;實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng);檢出限
摘要:

為提高米制品中轉(zhuǎn)基因成分實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)的靈敏度與檢出率,應(yīng)用模擬轉(zhuǎn)基因白粿干樣 品,對(duì)影響檢測(cè)結(jié)果的主要因素,包括樣品顆粒細(xì)度、DNA提取過程中樣品在十六烷基三甲基溴化銨裂解緩沖液中 溫育時(shí)間等因素進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:提取的DNA量在樣品顆粒細(xì)度與十六烷基三甲基溴化銨緩沖液溫育時(shí)間的9 種 處理組合間都有極顯著差異,其中最優(yōu)條件為樣品顆粒細(xì)度>100 目、十六烷基三甲基溴化銨緩沖液溫育時(shí)間>8 h (過夜)。采用最優(yōu)前處理組合,樣品的主要轉(zhuǎn)基因成分檢出限從公認(rèn)的轉(zhuǎn)基因含量0.01%(m/m)降到0.001%(m/m), 檢測(cè)靈敏度提高10 倍,有效提高了米制品轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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