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絲瓜多酚氧化酶的分離純化及酶學性質(zhì)
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 160 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 吳海霞,曹雨舟
關鍵詞: 絲瓜;多酚氧化酶;分離純化;酶學特性
摘要:

從絲瓜中分離純化出多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO),并對其部分酶學性質(zhì)進行研究。采用硫酸銨分級鹽析、透析、DEAE-Cellulose DE-52離子交換層析和Sephadex G-75分子篩凝膠過濾層析分離純化絲瓜PPO。純化所得酶的比活力為957.9 U/mg,純化倍數(shù)為28.3,酶活力回收率為18.5%;十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)及非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)檢測結(jié)果顯示該酶蛋白呈單一條帶,為單亞基蛋白,其分子質(zhì)量約為67.8 kD,且無同工酶;該酶最適pH6.0,最適溫度30 ℃,以左旋多巴(L-dopa)為底物,其米氏常數(shù)(Km)為1.32 mmol/L,最大反應速率(Vmax)為0.22 OD475 nm/min。

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