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天冬氨酸激酶突變體G277K中AK基因的克隆表達及酶學(xué)性質(zhì)表征
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 123 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 任 軍,閔偉紅,詹冬玲,方 麗,李慧穎,朱運明
關(guān)鍵詞: 天冬氨酸激酶;克隆表達;定點突變;酶學(xué)性質(zhì)
摘要:

通過序列比對和晶體結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)的G277位點高度保守,并與抑制劑Thr通過氫鍵相連,對其進行定點突變和酶學(xué)性質(zhì)表征。結(jié)果表明:突變體G277K的AK最適反應(yīng)條件是30 ℃、pH 8.5;動力學(xué)實驗結(jié)果顯示突變體AK的正協(xié)同效應(yīng)降低,趨向于米氏酶,參數(shù)S0.5、nH、酶比活力、Vmax分別是7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143 U/(mg·min);熱穩(wěn)定性實驗顯示,其30 ℃半衰期為2.3 h,3 h后酶活力喪失80%左右;Ni2+在低濃度時表現(xiàn)出顯著的激活效應(yīng);有機溶劑丙三醇、異丙醇和二甲基亞砜的體積分?jǐn)?shù)為1%時,對AK的酶活力有很好的激活作用,表明突變體AK對一些有機溶劑有一定的抗性;低濃度的賴氨酸和蛋氨酸對AK有激活作用。

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