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—— 中國食品雜志社
通過比較鰱魚卵半胱氨酸蛋白酶抑制因子（cysteine proteinase inhibitors，CPIs）粗提過程中的比活力（Azocasein法），確定其最佳粗提條件為：以含0.1 mmol/L苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）的20 mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）作為勻漿緩沖液，并于30 ℃對(duì)勻漿樣進(jìn)行pH 3.0酸處理10 min，然后堿回調(diào)至pH 8.0，CPIs純度提高了15.54 倍。進(jìn)一步經(jīng)SP Sepharose Fast Flow陽離子層析驗(yàn)證表明，與pH 4.0相比，pH 3.0酸處理能高效除去活性峰Ⅱ中的酸堿及熱不穩(wěn)定雜蛋白，使CPIs比活力提高了48.22 倍。采用SephacrylS-200分子篩層析，獲得部分純化的低分子CPIs組分Ⅱ-b和Ⅱ-c，比活力和純化倍數(shù)分別為1 098.59 U/mg、312.10 倍和1 769.23 U/mg、502.62 倍。電泳分析表明，明膠底物-SDS-反相酶譜法無法鑒定Ⅱ-b和Ⅱ-c的抑制活性；而與木瓜蛋白酶在適宜條件下反應(yīng)后進(jìn)行的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）則初步鑒定Ⅱ-b和Ⅱ-c中均含有至少7 kD和10 kD兩種低分子CPIs。最后經(jīng)質(zhì)構(gòu)分析表明，Ⅱ-b和Ⅱ-c以5 U/g添加入鰱魚魚糜時(shí)，均能夠極顯著提高鰱魚魚糜凝膠強(qiáng)度（48.77%和55.55%），抑制軟化。
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