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—— 中國食品雜志社
1株腸出血性大腸桿菌O157∶H7變種EC169菌株，攜帶stx基因但不表達(dá)志賀毒素。通過高效熱不對稱交錯聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（high-efficiency thermal asymmetric interlaced polymerase chain reaction，hiTAIL-PCR）hiTAILPCR擴(kuò)增得到EC169 stx1及其上游核苷酸片段并克隆測序，結(jié)果表明：EC169 q基因與標(biāo)準(zhǔn)株sakai q基因相比存在6個SNP位點。通過PCR擴(kuò)增O157∶H7高毒株EC150 q基因全長，并構(gòu)建表達(dá)載體pkk223-q分別轉(zhuǎn)化EC169和低毒株EC157。反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR實驗結(jié)果表明，外源q基因在EC169和EC157重組菌中可高效表達(dá)，并引起EC157stx轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，但EC169重組菌stx轉(zhuǎn)錄水平不變。反向乳膠凝集實驗結(jié)果亦證實EC157重組菌志賀毒素表達(dá)量提高，而EC169重組菌志賀毒素表達(dá)量不變。Q蛋白變異可能并非EC169志賀毒素不表達(dá)的主要原因。
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