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釀酒酵母APA1的定點(diǎn)突變以及與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP基因的共表達(dá)
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 129 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 馬 濤,姚明月,劉延琳
關(guān)鍵詞: 載體構(gòu)建;釀酒酵母;同義突變
摘要:

應(yīng)用基因突變技術(shù)向釀酒酵母APA1基因中引入同義突變,為進(jìn)一步研究APA1表達(dá)量與釀酒酵母硫化氫產(chǎn)量的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。從釀酒酵母S288c中利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增APA1基因,與EGFP基因融合構(gòu)建表達(dá)載體。以該載體為模板,通過(guò)一步法點(diǎn)突變技術(shù)向APA1基因中分別引入APA1-1/2/3/4 4 個(gè)突變。測(cè)序結(jié)果表明突變位點(diǎn)與預(yù)期結(jié)果一致。成功獲得了APA1的4 個(gè)同義突變。一步法點(diǎn)突變技術(shù)是一種高效的定點(diǎn)突變方法。分別轉(zhuǎn)化釀酒酵母YS59,熒光顯微鏡下可見綠色激發(fā)熒光,表明APA1-1/2/3/4與EGFP基因共表達(dá)。

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