領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：建立簡便、靈敏檢測金黃色葡萄球菌腸毒素I（staphylococcal enterotoxin I，SEI）的雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附方法（double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay，DAS-ELISA）。方法：利用DAS-ELISA檢測程序確定單克隆抗體、抗血清、辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的羊抗兔IgG（IgG/HRP）的最佳稀釋度，再通過檢測不同包被緩沖液、封閉時間、抗原包被時間、IgG/HRP作用時間以及四甲基聯(lián)苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine，TMB）顯色時間條件下的OD450 nm值對實驗條件進行優(yōu)化，最后用靈敏度、批內(nèi)變異、批間變異和加標回收率指標對方法進行評價。結(jié)果：抗SEI單克隆抗體的最佳稀釋質(zhì)量濃度為2.89 mg/L，抗SEI兔血清稀釋度1∶2 000，酶標二抗稀釋度1∶6 000；1×磷酸緩沖鹽溶液（pH 7.4）為最佳包被緩沖液；最佳封閉時間、抗原孵育時間、酶標二抗孵育時間和TMB顯色時間分別為60、90、30 min和15 min。該方法的回歸方程為y=0.040 9x＋0.042 9，R2=0.993 3；靈敏度為0.5 μg/L，精密度批內(nèi)變異低于10%，批間變異低于15%，除巴氏殺菌牛乳外，對生理鹽水、熟牦牛肉糜、大米飯和超高溫瞬時滅菌牛乳回收率達90%以上。結(jié)論：本研究建立了一種快速檢測SEI的雙抗夾心方法。
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