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副溶血性弧菌單克隆抗體的制備及特性鑒定
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 122 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 謝曼曼,李建武,王廣彬,曾海娟,翟緒昭,丁承超,劉武康,劉 箐
關(guān)鍵詞: 副溶血性弧菌;單克隆抗體;酶聯(lián)免疫吸附測定
摘要:

為制備特異性強的副溶血性弧菌的單克隆抗體,解決單克隆抗體對免疫學(xué)檢測產(chǎn)品研發(fā)的制約,以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ATCC 17802標(biāo)準(zhǔn)菌株免疫Balb/c小鼠,經(jīng)細胞融合、間接酶聯(lián)免疫吸附測定法篩選,獲得穩(wěn)定分泌抗副溶血性弧菌(ATCC 17802)菌株的單克隆雜交瘤細胞株3F7D7E8C4,通過體內(nèi)誘生腹水大量制備抗體,用亞類試劑盒測定抗體亞類為IgG1;采用辛酸硫酸銨沉淀法以及親和層析柱對腹水進行純化,聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗鑒定單克隆抗體的純度。制備得到腹水抗體效價為1∶16 000,純化后抗體效價為1∶8 000,抗體敏感性IC50達到106 CFU/mL。純化后的抗體與12 株副溶血性弧菌均能特異性結(jié)合,與其他9 種非副溶血性弧菌的食源性致病菌均無交叉反應(yīng)。

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