領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為分析馬乳酒樣乳桿菌ZW3（Lactobacillus kefiranofaciens ZW3）的一株突變株2#胞外多糖（exopolysaccharide，EPS）產(chǎn)量下降的原因。對突變株2#進(jìn)行基因組重測序后與野生菌ZW3全基因組比對，分析突變基因在代謝通路中EPS產(chǎn)量的相關(guān)性；利用實時熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）技術(shù)分析可能會與多糖產(chǎn)量相關(guān)的突變基因的相對表達(dá)量；構(gòu)建含有表達(dá)量變化明顯基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)至大腸桿菌并測定其酶活性，探究突變基因與產(chǎn)糖量的關(guān)系。結(jié)果經(jīng)全基因組分析比對，野生菌株ZW3與突變株2#在CDS區(qū)和啟動子區(qū)發(fā)生突變的基因共60?個，其中相關(guān)催化反應(yīng)酶類基因有6 個，分別為：WANG_0173、WANG_0174、WANG_0175（3 個基因均為編碼二羥丙酮激酶亞基部分）、WANG_0292（β-半乳糖苷酶小亞基）、WANG_0840（UDP-N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸/D-谷氨酸連接酶）、WANG_1108（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶），其中WANG_0292發(fā)生了同義突變。RT-qPCR分析突變基因相對表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)突變株WANG_1108基因相對表達(dá)量下降明顯，選取WANG_1108進(jìn)一步闡明與多糖產(chǎn)量的關(guān)系；成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pET28a-ZW3/2#-1108、并轉(zhuǎn)至表達(dá)菌株大腸桿菌BL21（DE3），誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳酶活性測定結(jié)果顯示，突變株中酶活性比野生菌降低了37%。由此推測基因WANG_1108的突變是影響突變株產(chǎn)糖量下降的原因之一。
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