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—— 中國食品雜志社
為提高褐藻膠裂解酶活力，采用易錯聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）技術對海洋細菌Tamlana sp. S12中具有代表性的酶組分Alg-2進行體外定向進化。經過2?輪易錯PCR及96?孔板發(fā)酵篩選，分別獲得2?株正突變和2?株負突變菌株，其酶比活力分別是親本（2?675.2?U/g）的162%、241%、53%、11%。酶的動力學分析顯示，正突變株P2-81的Km值比親本降低50%，而負突變株N2-47的Km值比親本提高106%，表明突變株對底物的親和力有極大的上升和下降。基因測序及氨基酸序列分析結果表明，Glu、Thr、Ser、Asp和Tyr對褐藻膠裂解酶活力提高起到正面的積極作用，而Lys的突變起到負面的消極作用，后續(xù)人工合成的定點突變則進一步證實Asp和Lys的正/負作用。本研究有助于深入理解褐藻膠裂解酶的催化機制，為后續(xù)利用理性設計手段改造褐藻膠裂解酶提供理論參考。
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