領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
克隆表達(dá)乳酸片球菌AS1.2696菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因，研究重組酶的酶學(xué)性質(zhì)。分析乳酸片球菌AS1.2696菌株的全基因組序列，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增目的基因，以pSE380為表達(dá)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒pSE-prha2和pSE-prha3，在大腸桿菌Escherichia coli XL-blue進(jìn)行表達(dá)，使用鎳親和層析純化重組蛋白，研究重組酶PRHA2、PRHA3的酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明，重組酶PRHA2的最適pH值和溫度分別為5.0和60?℃，Km值為（3.039±0.581）mmol/L，Vmax值為（2.032±0.186）μmol/（min·mg）；PRHA3的最適pH值和溫度分別為5.5和45?℃，Km值為（2.797±0.132）mmol/L，Vmax?值為（113.35±1.485）μmol/（min·mg）。PRHA2和PRHA3能夠水解人工底物對硝基苯基-α-L-吡喃鼠李糖苷（p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside，pNPR）以及α-1,6鍵的橙皮苷、蘆丁；PRHA2對4-硝基苯基-β-D-阿拉伯糖苷（4-nitrophenyl-β-L-arabinoside，pNPA）有一定的水解活性；PRHA3對淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C這幾種物質(zhì)C-7位的葡萄糖糖苷鍵有較弱的水解作用。此外，PRHA3能夠水解朝藿定C的C-3位以α-Rha(2→1)α-Rha連接的外側(cè)的鼠李糖苷鍵，在食品及醫(yī)療方面具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
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