領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
通過同源比對，對來自海洋氧化節(jié)桿菌（Arthrobacter oxydans KQ11）的右旋糖苷酶（記作AoDex）催化域及關(guān)鍵氨基酸進(jìn)行預(yù)測，運用定點突變將AoDex催化域418-QTDGIELYKGSTMKNTFFNANDD-440中的5 個氨基酸突變?yōu)楦拾彼幔@得5 種突變型右旋糖苷酶原核表達(dá)載體：pColdIII-KQN-Q418G、pColdIII-KQN-D420G、pColdIII-KQN-E423G、pColdIII-KQN-D439G、pColdIII-KQN-D440G，表達(dá)產(chǎn)物分別記為Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex、D440GDex。經(jīng)過發(fā)酵表達(dá)，Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex幾乎沒有酶活力。D440GDex酶活力與AoDex一致；所不同的是，D440GDex在25～40 ℃時的酶活力提高了2～3 倍，最適pH值也從AoDex的5.5變?yōu)?.5。數(shù)據(jù)表明，Q418、D420、E423、D439四個氨基酸殘基是AoDex催化域中的關(guān)鍵氨基酸。D440突變?yōu)楦拾彼釋υ撁傅男再|(zhì)有較大影響，也表明其不是催化域中的廣義堿。本研究表明AoDex的催化機(jī)制與糖苷酶49家族是一致的，為AoDex的功能改造提供了理論支持。
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