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基于微滴式和芯片式數(shù)字PCR技術(shù)的轉(zhuǎn)基因克螟稻成分的定量檢測
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 156 發(fā)表時間: 2019-06-11
作者: 鄧婷婷,黃文勝,葛毅強(qiáng),陳 穎
關(guān)鍵詞: 轉(zhuǎn)基因大米;克螟稻;定量;數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
摘要:

以轉(zhuǎn)基因克螟稻品系為研究對象,通過大米內(nèi)源蔗糖磷酸合成酶基因和轉(zhuǎn)基因克螟稻品系特異性序列的絕對拷貝數(shù)分析,建立轉(zhuǎn)基因克螟稻成分的雙重數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)定量分析方法。本研究中轉(zhuǎn)基因克螟稻定量體系中最適DNA添加量在10 pg~13 ng之間,模板斷裂程度、PCR擴(kuò)增退火溫度等因素對定量結(jié)果的影響不大。其定量的絕對靈敏度達(dá)1 copies/μL,可在微滴式和芯片式數(shù)字PCR平臺上準(zhǔn)確檢測質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.1%~100%之間的轉(zhuǎn)基因克螟稻成分,尤其是對低于1%的樣品,其定量準(zhǔn)確性高于傳統(tǒng)的實(shí)時熒光PCR方法。本研究建立的轉(zhuǎn)基因克螟稻成分定量分析方法適用性較好,可用于轉(zhuǎn)基因水稻規(guī)范化與標(biāo)準(zhǔn)化的定量分析。

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