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—— 中國食品雜志社
采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳、雙抗夾心酶聯免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等方法，以Jug r 1含量為指標，對云南7 個不同產地的泡核桃（Juglans sigillata）進行篩選，進一步利用硫酸銨分級沉淀、凝膠過濾層析、液相色譜-串聯質譜等手段制備Jug r 1并進行優(yōu)化和鑒定，通過圓二色譜對Jug r 1的結構進行表征，最后采用雙抗夾心ELISA法測定其含量。結果表明：保山隆陽產地核桃的總蛋白含量和Jug r 1含量均最高，用于后續(xù)實驗；經優(yōu)化得到Jug r 1的最佳硫酸銨分級沉淀分離區(qū)間為40%～80%，進一步對其進行凝膠過濾層析的最佳條件為上樣質量濃度30 mg/mL、上樣體積4 mL、洗脫流速1 mL/min；在此條件下純化得到Jug r 1含量達19.90 mg/120 mg上樣量，蛋白得率為16.58%；質譜分析表明該蛋白符合Jug r 1的典型特征；圓二色譜顯示Jug r 1的二級結構以α-螺旋為主，多種構象共存；經“兩步法”分離純化后可獲得蛋白純度占總蛋白96%以上的Jug r 1。本結果可為深入研究Jug r 1提供科學基礎，并為其他堅果致敏蛋白的分離純化提供參考。
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