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糖皮質(zhì)激素廣譜特異性單克隆抗體的制備及其ic-ELISA方法的建立
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 170 發(fā)表時間: 2019-09-26
作者: 姚添淇,勞翠瑜,王士峰,胡桂平,張世偉
關(guān)鍵詞: 糖皮質(zhì)激素|同源策略|異源策略|廣譜特異性|間接競爭酶聯(lián)免疫吸附(ic-ELISA)法
摘要:

將氫化可的松半抗原HYD通過活化脂法與鑰孔戚血藍(lán)蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶聯(lián)獲得氫化可的松完整抗原KLH-HYD,并對小鼠肌肉注射此抗原,使小鼠免疫;通過雜交瘤技術(shù)獲得1 株能夠穩(wěn)定分泌氫化可的松的單克隆抗體細(xì)胞株HYD-C1,并通過腹水制備大量抗體。將氫化可的松半抗原HYD和地塞米松半抗原DEX通過活化脂法分別與卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶聯(lián)作為包被原,建立糖皮質(zhì)激素的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附檢測(indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。結(jié)果:在同源包被情況下氫化可的松靈敏度為1.63 ng/mL,異源包被情況下靈敏度為0.24 ng/mL;在交叉抑制實驗中,異源策略中的各糖皮質(zhì)激素靈敏度均高于同源策略中的結(jié)果,異源策略條件下很好地覆蓋了本研究中所檢測的糖皮質(zhì)激素,使該抗體具備良好的廣譜特異性。在異源策略添加回收實驗中平均添加回收率在77.5%~111.3%之間,落在合理范圍內(nèi),滿足檢測需求。結(jié)論:成功制備出氫化可的松單克隆抗體,建立了同源和異源策略糖皮質(zhì)激素檢測方法,結(jié)果發(fā)現(xiàn)異源策略中糖皮質(zhì)激素的靈敏度高于同源策略,并使該方法具有更好的廣譜特異性。

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