領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
通過依賴解旋酶恒溫基因擴增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）技術(shù)建立一種快速檢測發(fā)酵乳中植物乳桿菌的方法。根據(jù)植物乳桿菌scrB基因序列（基因號為AJ579541.1）設(shè)計特異性引物，通過實驗篩選出檢測體系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的較優(yōu)含量，達(dá)到最優(yōu)反應(yīng)條件。所建立的HDA方法通過人工添加植物乳桿菌確定檢出限，通過多種菌株擴增驗證方法特異性，通過擴增產(chǎn)物電泳和序列比對分析驗證方法一致性和穩(wěn)定性。結(jié)果表明：采用HDA法檢測發(fā)酵乳中植物乳桿菌，反應(yīng)體系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的適宜添加量分別為0.15 μg和5.0 μg，特異性良好，與涉及的其他菌株均未發(fā)生擴增，檢出限為2.8×101 CFU/g，擴增序列與設(shè)計序列長度（273 bp）一致且序列同源性為100%；本研究建立的方法可以快速檢測發(fā)酵乳中植物乳桿菌，具有靈敏度高、操作簡單、應(yīng)用前景廣等特點。
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